Immunohematology - 12 Compatibility Testing

          IMMUNOHEMATOLOGY  BLOOD BANKING PROCEDURES:  COMPATIBILITY TESTING   OUTLINE  •   Compatibility Testing  o   Collection and Preparation of Samples  o   Compatibility Testing Protocols  o   Crossmatching      COMPATIBILITY TESTING  •   A pretransfusion procedure performed to ensure the safety of the patient during and after blood transfusion  o   Prevents transfusion reaction that can lead to series of complications  •   Called crossmatching  because the patient’s sample are  tested against the donor’s sample  •   Takes 1 hour to complete  COLLECTION AND PREPATION OF SAMPLES  •   Patient Identification.  o   Important to prevent clerical error  •   Collection  •   Serum is the preferred specimen for compatibility testing because it lacks fibrinogen which fibrin clots may cause false positive  o   Uses red top/plain top  o   Do not use SST  o   Ensure proper clotting  •   Hemolysis should be avoided.  o   May cause false positive  •   Ag-ab reactions are based on  o   Hemolysis  o   Agglutination  •   Why serum and not plasma?  o   Plasma may cause small fibrin clots to form which may be difficult to distinguish from true agglutination  o   Plasma may inactivate complement so that antibodies may not be detected  •   Age of Specimen  o   The freshest sample possible should be used for compatibility testing.  ▪   Fresh sample must be tested immediately  ▪   Pilot tube - cut from the tube attached to the blood bag that is used for testing  ▪   Patient samples should be kept for 7-14 days for retesting  o   Specimens must be less than 3 days old if the patient has been transfused or pregnant within the past 3 months.  o   Must be 3 days old because it represents the current or actual immunologic status of the patient  o   If autologous procedure, it must always be retyped  o   In case of emergency, safest blood to give is blood type O- pRBC because it lacks highly immunogenic ABO Ag (AB plasma lacks high titer anti-A, anti-B, and anti- AB that’s why it is not safe for transfusion)      •   Sample Storage  o   AABB requires that patient samples must be stored between 1-6C for at least 7 days after transfusion  o   The crossmatch sample store at ref. temp. is used in the investigation of transfusion reaction if it appears/occurs in the patient  •   Use of Check Cell/Control Cell  o   Used to validate all negative AHG test reaction  o   To be valid, check cell must give a positive agglutination reaction  o   To check for the reaction of reagent  •   Invalid Check Cell Result  (negative; w/o agglutination)  o   Reagent is deteriorating  o   AHG is already neutralized  o   Not washed properly  COMPATIBILITY TESTING PROTOCOLS  •   ABO Grouping  o   Most critical pretransfusion serologic test  ▪   Any incompatibility can cause the most severe transfusion reaction which is Acute Immunologic Hemolytic Transfusion Reactions (AIHTR) that can be manifested within 24 hours  o   If the patient’s ABO group cannot be satisfactorily determined and immediate transfusion is essential, group O packed RBCs should be utilized  •   Rh Typing  o   If Rh type of the recipient cannot be determined and transfusion is essential, Rh-negative blood should be given   CROSSMATCHING  •   Major X-Match :  Donor’s cells (ag) + Recipient’s serum (ab)  (PS + DR) = (P ab + D ag)  •   Minor X-Match :  Donor’s serum (ab) + Recipient’s cells (ag)  (PR + DS) = (P ag + D ab)  •   After 14 days → longest transfusion reaction  3 PHASES OF CROSSMATCHING  •   Immediate Spin  in saline at R t → detects IgM  o   M  →  centrifuge  →  20 secs  →  check aggltn/hemolysis  •   Thermophase/37ºC  with enhancement medium (e.g.  albumin, LISS, PEG)  →  Detects IgG  o   M + EM  →  30-45 mins  →  centrifuge  →  check  •   AHG Phase  after washing incubated cells with saline.  o   M + AHG  →  centrifuge  →  check  o   Detect non-agglutinating ab  •   *Check cells/Coombs control cells (IgG sensitized cells) should be added to tubes that demonstrate no agglutination. For results to be considered valid, agglutination must occur.  TECHNIQUES IN CROSSMATCHING  •   Saline Technique  o   PS + DR in saline medium  o   IgM detection at RT  o   Detects ABO incompatibilities  •   High Protein (albumin)  o   PS + DR in albumin medium/enhancement  o   IgG detection at 37C  o   Detects Rh incompatibilities 

          •   AHG Technique  o   PS + DR in AHG medium  o   IgG detection at 37C  o   Detects Duffy, Kidd, kell antibodies  •   Broad Spectrum Technique  o   IgM and IgG are detected  REPORTING OF RESULTS  •   A  compatible  crossmatch  is  indicated  by  by  absence  of agglutination and/or hemolysis at any stage of crossmatch  •   The absence of agglutination indicates that the patient has no demonstrable antibodies with a specificity for any antigen on donor’s RBCs  •   Case 1  o   Major - Neg (compatible)  o   Minor - Neg (compatible)  o   Release blood to the ward  •   Case 2  o   Major - Neg (compatible)  o   Minor - Pos (incompatible)  o   Release blood as packed RBCs (remove the plasma  •   Case 3  o   Major - Pos (incompatible)  o   Minor - Neg (compatible)  o   Do not release the blood to the ward  •   Case 4  o   Major - Pos (incompatible)  o   Minor - Pos (incompatible)  o   Never release the blood  •   Example Case 1  o   Patient - O  ▪   Ag: H  ▪   Ab: anti-A, anti-B  o   Donor - B  ▪   Ag: B, H  ▪   Ab: anti-A  o   Major  ▪   PS + DR  ▪   PS: O  →  anti-A, anti-B  ▪   DR: B  →  B, H  ▪   Incompatible  o   Minor  ▪   PR + DS  ▪   PR: O  →  H  ▪   DS: B  →  anti-A  ▪   Compatible  o   Reporting  ▪   Major: Incompatible  ▪   Minor: Compatible  ▪   Do not release the unit               •   Example Case 2  o   Patient - AB  ▪   Ag: A, B, H  ▪   Ab: none  o   Donor - B  ▪   Ag: H  ▪   Ab: anti-A, anti-B  o   Major  ▪   PS + DR  ▪   PS: AB  →  none  ▪   DR: O  →  H  ▪   Compatible  o   Minor  ▪   PR + DS  ▪   PR: AB  →  A, B, H  ▪   DS: O  →  anti-A, anti-B  ▪   Incompatible  o   Reporting  ▪   Major: Compatible  ▪   Minor: Incompatible  ▪   Do not release the unit  INCOMPATIBLE CROSSMATCHES  Reactions  Possible Cause  Resolution  Neg ab screen, Incompatible IS Xmatch  ABO incompatibility  Retype donor and recipient. Xmatch with ABO compatible donor  1 ab screening cell and 1 donor pos in AHG  Alloantibody  Identify ab. Xmatch units neg for corresponding ag  Ab screening cells and all donors except 1 neg at 37degC and in AHG. 1 donor pos in AHG only.  Positive DAT on donor  Perform DAT on unity (if positive, return to collecting facility)  Ab screening cells, donors and AC positive in AHG  Warm autoantibody  Not to transfuse. If unavoidable, find “least incompatible unit”  Ab Screening cells, donors and AC positive at 37degC, neg AHG  Rouleaux  Saline replacement technique