Urinalysis and other Body Fluids Lab - 03 Chemical Urine Exam

          ANALYSIS OF URINE AND OTHER BODY FLUIDS LABORATORY  CHEMICAL URINE EXAMINATION   OUTLINE  •   Introduction  •   Chemical Urine Examination  o   Reagent Strip (10 Parameters)  o   Benedict’s Test (Glucose)  o   Sulfosalicylic Acid Precipitation (SSA) Test (Protein)      INTRODUCTION  •   Routine chemical examination of urine has changed dramatically since the early days of urine testing, due to the development of the reagent strip method for chemical analysis. Reagent strips currently provide a simple, rapid means for performing medically significant chemical analysis of urine, including pH, protein, glucose, ketones, blood, bilirubin, urobilinogen, nitrite, leukocytes, and specific gravity.  •   Certain variations relating to chemical reactions, sensitivity, specificity, and interfering substances occur among the products and are discussed in the following sections. Reagent strip brands are also specified by instrumentation manufacturers.  CHEMICAL URINE EXAMINATION  REAGENT STRIP (10 PARAMETERS)  Parameters  Principle  pH   Double indicator system  Protein   Protein error of indicators  Glucose   Double sequential enzymatic reaction  Ketones   Nitroprusside Reaction  Blood   Pseudoperoxidase activity of Hgb  Bilirubin   Diazo Reaction  Urobilinogen   Ehrlich's Reaction (M); Diazo Reaction (C)  Nitrite   Greiss Reaction  Leukocyte   Esterase Hydrolysis of Acid Ester  Specific Gravity   Change in pKa of polyelectrolytes   MATERIALS  •   Reagent Strip  •   Test Tube  •   Test Tube Rack  •   Urine Specimen  PROCEDURE: (URINALYSIS TESTING USING  SIEMENS MULTISTIX 10 SG REAGENT STRIPS )  1.  Collect fresh urine specimen in a clean, dry container. If  specimen has been refrigerated, let it come to room temperature before testing. Mix well immediately before testing.   2.  Remove one strip from the bottle of strips and replace the  cap. Completely immerse reagent areas of the strip in the urine and remove immediately to avoid dissolving out reagents.   3.  While removing, run the edge of the strip against the rim of  the urine container to remove excess urine. Hold the strip in a horizontal position to prevent possible mixing of chemicals from adjacent reagent areas and/or contaminating the hands with urine.  4.  Compare reagent areas to coresponding color chart on the  bottle label at the time specified. Hold strip close to color blocks and match carefully. Avoid laying the strip directly on the color chart, as this will result in the urine soiling the chart. PROPER READ TIME IS CRITICAL FOR OPTIMAL RESULTS.  •   READ :  o   30 seconds: GLUCOSE & BILIRUBIN  o   40 seconds: KETONE  o   45 seconds: SPECIFIC GRAVITY  o   60 seconds: pH, PROTEIN, UROBILINOGEN, BLOOD & NITRITE  o   120 seconds: LEUKOCYTE ESTERASE  o   The pH and protein areas may also be read immediately or at any time up to 2 minutes after dipping.  •   After dipping the strip,check the pH area. If the color on the pad is not uniform, read the reagent area immediately, comparing the darkest color to the appropriate color chart.   •   All reagent areas except leukocytes may be read between 1 and 2 minutes for identifying negative specimens and for determination of the pH and specific gravity.   •   A positive reaction (small or greater) at less than 2 minutes on the leukocyte test may be regarded as a positive indication of leukocytes in urine. Color changes that occur after 2 minutes are of no diagnostic value.  RESULTS OF THE TEST/S           

          BENEDICT'S TEST (GLUCOSE)  PRINCIPLE  •   Benedict’s test is performed by heating the reducing sugar solution with Benedict‘s reagent. The presence of the alkaline sodium carbonate converts the sugar into a strong reducing agent called enediols. During the reaction, enediols decrease the cupric particles (Cu 2 +) present in  Benedict’s reagent to cuprous particles (Cu+) which appear as red copper oxide (Cu 2 O) which is insoluble in  water.  •   When Benedict’s reagent solution and reducing sugars are heated together, the solution changes its color to orangered/ brick red precipitate. The red-colored cuprous oxide is insoluble in water and hence, separate out from the solution. When the concentration of the reducing sugar is high in the solution, then the color becomes more intense (reddish) and the volume of the precipitate increases in the test tube making it clearly visible.  MATERIALS  •   Benedict's Reagent  •   Test Tube  •   Test Tube Rack  •   Water Bath  •   Disposable Pipettes  •   Urine Specimen  PROCEDURE  1.  Place 5mL of Benedict's reagent in a test tube. 2.  Add 8 drops of urine, shake, and boil for 2-5 minutes in a  boiling water bath.  3.  Allow to cool slowly and take note of the result.  RESULTS OF THE TEST/S   TABLE OF RESULTS FOR BENEDICT’S TEST  -  Negative  No change in color  +  Trace  Green opacity. No precipitate  +  Positive  Green solution with yellow precipitate  ++  Positive  Green to yellow solution with yellow precipitate  +++  Positive  Muddy orange solution with yellow precipitate  ++++  Positive  Orange to brick red precipitate    SULFOSALICYLIC ACID PRECIPITATION (SSA) TEST  (PROTEIN)  PRINCIPLE  •   Based on the precipitation of urine protein by strong acid, sulfosalicylic acid.  MATERIALS  •   SSA Reagent  •   Test Tube  •   Test Tube Rack  •   Parafilm  •   Disposable Pipettes  •   Centrifuge  •   Urine Specimen  PROCEDURE   •   Fill 3/4 a pyrex test tube with urine.  •   Centrifuge urine.  •   Add 3mL of 3% SSA reagent to 3mL urine.  •   Mix by inversion & observe for cloudiness.  •   Grade degree of turbidity.  RESULTS OF THE TEST/S  TABLE OF RESULTS FOR QUALITATIVE PROTEIN TESTS  -  Negative  No Cloudiness  +  Trace  Barely visible cloudines  +  Positive  Distinct cloudiness but non-granular  against light with urine visible through it  ++  Positive  Distinct cloudiness, granular against light  +++  Positive  Heavy cloudiness with distinct flocculi  ++++  Positive  Dense heavy cloud with large flocculi